ELISA試劑盒的檢測(cè)方法步驟
ELISA檢測(cè)方法的解析：一開(kāi)始，試劑盒沒(méi)有打開(kāi)的時(shí)候，所有試劑都需要按照試劑瓶上面的標(biāo)簽所示來(lái)保存。值得在意的是，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、孔板保存于-20℃。接著，我們?cè)賮?lái)看看具體的方法吧：
ELISA實(shí)驗(yàn)的類型
抗原捕獲是多種類型中的一個(gè)共同點(diǎn)。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。
通常大家使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是*選擇，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無(wú)標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，以結(jié)合捕獲抗體。
此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是48孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
第二、交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗，來(lái)避免上述問(wèn)題。
第三、檢測(cè)方式
如今檢測(cè)ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。
第四、提出的特別注意
1. 按試劑盒說(shuō)明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。
2. 試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。
3. 自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。
4. 試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
第五、ELISA試劑盒的評(píng)價(jià)角度思考
1. 靈敏度：①為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;②為試劑對(duì)大量樣品中陽(yáng)性檢出的能力。
2. 特異性、精密度、準(zhǔn)確度、簡(jiǎn)便性、安全性。
3. 經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過(guò)大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本，而市場(chǎng)價(jià)格比較合理;
4. 試劑評(píng)價(jià)：需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測(cè)。
另外，ELISA試劑盒使用后，要將剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存哦!開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，注意避免潮濕。
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