更新時(shí)間:2023-10-26
C58C1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 菌株一種常用于質(zhì)??寺〉木?。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
C58C1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 操作方法(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
C58C1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
C58C1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? 5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
NT-proBNP 人N端前腦鈉素 規(guī)格: 48T/96T
NT-proBNP 人N端前腦鈉素 規(guī)格: 48T/96T
NLR 人NOD樣受體 規(guī)格: 48T/96T
NHE3 人Na+/H+交換體3 規(guī)格: 48T/96T
PAL 人L苯解氨酶 規(guī)格: 48T/96T
Jo1/HRS 人Jo1抗體 規(guī)格: 48T/96T
IRAP 人ICE蛋白酶激活因子 規(guī)格: 48T/96T
人H-ras ELISA Kit,48T/96T 人H-ras ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
人H-ras ELISA Kit,48T/96T 人H-ras ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
GAP 人GTP酶活化蛋白 規(guī)格: 48T/96T
Flt-3L 人FMS樣激酶3配體 規(guī)格: 48T/96T
Flt3 人FMS樣激酶3 規(guī)格: 48T/96T
E-Selectin/CD62E 人E選擇素 規(guī)格: 48T/96T
E-Cad 人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白 規(guī)格: 48T/96T
EJ/GlyRS 人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體 規(guī)格: 48T/96T
D2D 人D二聚體 規(guī)格: 48T/96T
D2D 人D二聚體 規(guī)格: 48T/96T
DBP 人DNA結(jié)合蛋白 規(guī)格: 48T/96T
DKK1 人Dickkopf 1 規(guī)格: 48T/96T
CNP 人C型鈉尿肽 規(guī)格: 48T/96T
C-Peptide 人C肽 規(guī)格: 48T/96T
CRP 人C反應(yīng)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
CP 人C多肽 規(guī)格: 48T/96T
CXCR3 人CXC趨化因子受體3 規(guī)格: 48T/96T
CXCR1 人CXC趨化因子受體1 規(guī)格: 48T/96T
CX3CR1 人CX3C趨化因子受體1 規(guī)格: 48T/96T
人c-sis ELISA Kit,48T/96T 人c-sis ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
人c-sis ELISA Kit,48T/96T 人c-sis ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
C58C1 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50? c-myc 人c-myc癌基因產(chǎn)物 規(guī)格: 48T/96T
人c-myc ELISA Kit,48T/96T 人c-myc ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
人c-jun ELISA Kit,48T/96T 人c-jun ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T