更新時(shí)間:2023-10-26
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*102 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
anti-HAV 人抗甲型肝炎病毒IgM抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-HAV 人抗甲型肝炎病毒IgG抗體 規(guī)格: 48T/96T
EMA IgA 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA 規(guī)格: 48T/96T
TTN 人抗肌聯(lián)蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AAA 人抗肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
CCP 人抗環(huán)胍氨酸肽抗體 規(guī)格: 48T/96T
RSV 人抗呼吸道合胞病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
RBC 人抗紅細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
APF 人抗核周因子抗體 規(guī)格: 48T/96T
ANF 人抗核因子抗體 規(guī)格: 48T/96T
AnuA-IgG 人抗核小體抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
ARPA/Rib-P 人抗核糖體P蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
RNP-Ab 人抗核糖核蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AFA/snoRNP/U3RNP 人抗核仁纖維蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
ANA 人抗核仁抗體 規(guī)格: 48T/96T
gp210 人抗核膜糖蛋白210抗體 規(guī)格: 48T/96T
ANA 人抗核抗體 規(guī)格: 48T/96T
ASA 人抗骨骼肌抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-tox IgM 人抗弓形體IgM抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-tox IgG 人抗弓形體IgG抗體 規(guī)格: 48T/96T
AGAA 人抗高爾基體抗體 規(guī)格: 48T/96T
LMA 人抗肝細(xì)胞膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
LC1 人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體 規(guī)格: 48T/96T
LSP 人抗肝特異性脂蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
LSP 人抗肝特異性脂蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
LKM 人抗肝腎微粒體抗體 規(guī)格: 48T/96T
CAM-ab 人抗鈣調(diào)素特異抗體 規(guī)格: 48T/96T
ACAST-DⅣ 人抗鈣蛋白酶抑素抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-PIV IgM 人抗副流感病毒IgM抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-RV IgG 人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體 規(guī)格: 48T/96T
ABM-Ab 人抗肺泡基底膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
MSA 人抗紡錘體抗體 規(guī)格: 48T/96T
PM-Scl/PM-1 人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-HDV 人抗丁型肝炎病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
PR3 Ab-IgG 人抗蛋白酶3抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
ssDNA 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體 規(guī)格: 48T/96T
AMA 人抗單核細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
TRAb 人抗促甲狀腺素受體抗體 規(guī)格: 48T/96T
C1q 人抗補(bǔ)體1q抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-HCV 人抗丙型肝炎病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
EBMZ 人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-typhus-Ab 人抗斑疹傷寒抗體 規(guī)格: 48T/96T
AAA 人抗白蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 IFNα-Ab 人抗α干擾素抗體 規(guī)格: 48T/96T
α-Fodrin IgG/IgA 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA 規(guī)格: 48T/96T
人抗SS-B/La抗體ELISA Kit,48T/96T 人抗SS-B/La抗體ELISA