更新時(shí)間:2023-11-07
片姜黃探針法PCR鑒定試劑盒說明書公司相關(guān)產(chǎn)品L-甲狀腺素鈉5克RTACTR3 2,9-二甲基鄰菲啰啉,Neocuproine,CP,99%,規(guī)格:50克ACTR6 鈣100克ACTR8 石灰,Calcium oxide,CP,規(guī)格:50毫克ACVR1 N-乙酰-L-100克
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 片姜黃探針法PCR鑒定試劑盒說明書 |
英文名稱 | wenyujin concisum |
貨號(hào) | BH-P99885 |
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測。
二、DNA提?。?/span>
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 酞菁銅(II)(β-型)(>90.0%(T))Copper(II) Phthalocyanine (β-form)質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(T)
小鼠子細(xì)胞;U14三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲)銪(Ⅲ)(>95.0%(T))Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)
METAP2 Others Mouse 小鼠 METAP2 / MAP2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
CM-M001小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
Hela, 人細(xì)胞系 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3TK細(xì)胞 SPA-A1(肺腺癌細(xì)胞)4,4'-雙(5-甲基-2-苯并惡唑基)芪(升華提)(>96.0%(HPLC))4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(HPLC)
JEG-3(人絨毛膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 輪環(huán)藤寧四乙酸/1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid質(zhì)量規(guī)格:>95%
人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2p, p’-DDE(標(biāo)準(zhǔn)品)p, p’-DDE質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
PPP3CA Others Human 人 PPP3CA / 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) p, p’-DDE標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)p, p’-DDE solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3%
CL-0429Romas(人瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2敵草腈(標(biāo)準(zhǔn)品)Dichlobenil質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
人絨毛膜內(nèi)皮細(xì)胞 人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-ESF-1細(xì)胞 Sol8(小鼠骨骼肌肌肉母細(xì)胞)乙二醇苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Ethylene glycol monophenyl ether質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
人急性母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4(標(biāo)準(zhǔn)品)Budesonide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 亞鈣Calcium Folinate質(zhì)量規(guī)格:>98%,水合物,BR
CM-H110人皮膚肥大細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL亞鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)Calcium Folinate質(zhì)量規(guī)格:>98%,含量測定
5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 瘤,EL4IL-2細(xì)胞 PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)Camptothecin質(zhì)量規(guī)格:> 99%,喜樹提取
小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11(標(biāo)準(zhǔn)品)Camptothecin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
片姜黃探針法PCR鑒定試劑盒說明書CCL18 Protein Human 重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)偏釩酸鈉shēng huà shì jì容量:0.25毫升
MCF-7(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2,5-二溴 2,5-Dibromopyridinq 64-8-
貓腎細(xì)胞;CRFK正shēng huà shì jì容量:100克
人顱骨造骨細(xì)胞 (HCO) ( 5×105 )馬丁肉湯shēng hu
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。